Preparazione di colture di agrobatteri per la somministrazione di geni nelle cellule vegetali

Inizia con una coltura di Agrobacterium tumefaciens coltivata in un substrato integrata con due antibiotici per prevenire la contaminazione e garantire la ritenzione dei plasmidi.

I batteri contengono un vettore di espressione vegetale che porta un gene di interesse e un gene di resistenza agli antibiotici.

Contengono anche un plasmide aiutante con una regione di geni di virulenza necessaria per trasmettere il gene di interesse nelle cellule vegetali.

Trasferire una porzione in un tubo contenente un mezzo tamponato integrato con acetosiringone, una molecola di segnalazione di origine vegetale, e gli antibiotici. Incuba con lo scuotito.

L'acetosiringone si diffonde nella cellula, attiva una via di segnalazione e attiva l'espressione dei geni di virulenza necessari al trasferimento del gene di interesse.

Trasferire la coltura, centrifugare per raccogliere i batteri e scartare il surnatante.

Aggiungi un tampone salino e lava ripetutamente le cellule per rimuovere gli antibiotici aggiunti.

Sospendere i batteri nel tampone con acetosiringone e incubare senza scuotere per mantenere l'espressione genica della virulenza.

Usa subito la cultura per una trasformazione efficiente.

Usa una punta per pre