Indagine sull'eliminazione mediata dall'autofagia dei batteri intracellulari in vitro

Prendiamo colture di cellule renali di maiale, con una coltura pre-trattata con un inibitore che aumenta il pH lisosomiale, compromettendo la degradazione autofagica-lisosomica.

Aggiungi batteri patogeni e centrifuga per aumentare il contatto ospite-patogeno.

Incubare per permettere l'invasione batterica e l'internalizzazione nelle vescicole endocitarie.

I batteri interiorizzati consumano i nutrienti dell'ospite per replicarsi, scatenando lo stress metabolico.

Questo stress attiva l'autofagia, dove una membrana autofagica si espande attorno alla vescicola, formando un autofagosoma.

Nelle cellule non trattate, l'autofagosoma prende di mira i batteri per la degradazione lisosomica.

Nelle cellule trattate con inibitori, la clearance autofagica è compromessa, portando a carichi batterici più elevati.

Dopo l'infezione, lavare le cellule e applicare un antibiotico per eliminare i batteri extracellulari.

Aggiungi un enzima per digerire la matrice extracellulare e spostare le cellule.

Lisa meccanicamente le cellule per liberare i batteri intracellulari.

Placca i lisati per permettere la crescita batterica.

Meno colonie provenienti dalle cellule non trattate confermano il ruolo della via di degradazione autofagia-lisosomale nell'eliminazione dei batteri intracellulari.