Test microfluidico basato su fagi per rilevare E. coli vitale in campioni d'acqua

Inizia con un campione d'acqua contaminata che probabilmente contiene coliformi fecali, inclusa E. coli.

Eseguire una diluizione seriale in acqua distillata per ridurre la torbidità e il carico microbico.

Mescola il campione diluito desiderato con il mezzo nutriente e caricalo in un chip microfluidico.

Utilizzare la filtrazione a vuoto per catturare i batteri su una membrana all'interno del canale serpentino del chip.

Aggiungi il mezzo nutritivo nella camera superiore e incuba per favorire il recupero batterico.

Sostituire il mezzo con una soluzione di fagi specifici di E. coli portanti il gene della luciferasi.

Incubare per permettere l'infezione dei fagi, dove il DNA del fago si replica, degrada il DNA ospite e forma nuovi faghi oltre a produrre luciferasi. Poi, le cellule infette si lisano per liberare la luciferasi.

Applicare la filtrazione a vuoto per trasferire la luciferasi a una membrana di cattura.

Aggiungi un substrato che reagisce con la luciferasi per generare un segnale luminescente.

Utilizzando un tubo fotomoltiplicatore, misura la luminescenza, che è proporzionale al numero di cellule di E. coli vitali nel campione d'acqua.