Potenziamento mediato da Wnt5A della clearance batterica nei macrofagi murini

Prendiamo una coltura aderente di macrofagi murini.

Tratta bene il test con un buffer contenente Wnt5A, una molecola di segnalazione, e il controllo solo con buffer.

Infettare con un patogeno batterico e incubare.

Nelle cellule di test, Wnt5A attiva una cascata di segnalazione che favorisce la riorganizzazione del citoscheletro per aumentare l'assorbimento batterico nei fagosomi, mentre le cellule di controllo prive di questo segnale interiorizzano meno batteri.

Lavare per rimuovere i batteri non interiorizzati, poi incubare con un mezzo contenente antibiotici per eliminare i batteri extracellulari rimanenti.

La segnalazione Wnt5A prepara i fagosomi contenenti batteri alla fusione con i lisosomi, permettendo così la degradazione batterica.

Alcuni batteri fuggono rompendo i fagolisomi.

Nelle cellule di controllo, una maturazione limitata del fagosoma porta a una maggiore fuga.

Preleva le celle in tempi definiti. Aggiungi acqua distillata per indurre lo shock osmotico, lisando le cellule e rilasciando batteri intracellulari.

Distribuire i lisati sulle piastre di agar e incubare.

Contare le colonie per valutare il maggiore declino batterico dipendente dal tempo nelle cellule trattate con Wnt5A.