JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 1:29 min. • February 26th, 2026
Inizia con una coltura di cellule immunitarie infettata da batteri patogeni che formano corpi di inclusione intracellulare.
L'infezione batterica compromette la via di presentazione dell'antigene nelle cellule immunitarie.
Prendi una coltura non infetta come controllo.
Successivamente, aggiungi un antigene proteico modello e incuba.
Le cellule immunitarie internalizzano, elaborano e presentano i peptidi modello derivati da antigeni sulle molecole MHC-I.
Dopo l'incubazione, lavare le cellule per rimuovere qualsiasi antigene non trattato.
Fissa le cellule, poi aggiungi un agente di tempra per neutralizzare il fissativo.
Introdurre le cellule T CD8+ ingegnerizzate e incubare.
Queste cellule riconoscono il frammento di antigene mostrato sulla molecola MHC-I, si attivano e secernono un enzima che funge da marcatore per la presentazione dell'antigene mediata da MHC-I.
Successivamente, aggiungi un substrato che reagisce con l'enzima per produrre un segnale colorimetrico.
Misura l'assorbenza. Una minore assorbenza nella coltura cellulare infetta rispetto a quella non infetta indica una diminuzione dell'efficienza della presentazione dell'antigene MHC-I a causa di un'infezione batterica.