Valutazione della virulenza batterica utilizzando il test di tossicità liquida di C. elegans

Prendere una piastra multipozzo contenente sospensioni di un batterio non patogeno, che funge da controllo, e vari ceppi di batteri patogeni per valutarne la virulenza relativa.

I batteri sono sospesi in un mezzo a basso contenuto di nutrienti per prevenire la crescita eccessiva e per imitare un ambiente favorevole all'infezione.

Aggiungere vermi C. elegans in stadio L4 in ciascun pozzo e incubare la piastra sotto agitazione continua per aumentare il contatto tra batteri e vermi.

I vermi si nutrono dei batteri, che entrano nel loro tratto intestinale e lo colonizzano.

I batteri patogeni rilasciano tossine che danneggiano i tessuti intestinali, portando a tossicità sistemica e alla morte finale dei vermi.

Dopo l'incubazione, contare i vermi vivi in ogni pozzo e generare un grafico per valutarne i tassi di sopravvivenza.

Le differenze nei tassi di sopravvivenza dei vermi riflettono la virulenza relativa di ciascun ceppo batterico.

Dopo aver coltivato ceppi di Aeromonas e misurato la loro assorbibilità come descritto in precedenza, centrifugare il brodo batterico a 3.500 g per 15 minuti. Regola il brodo batterico con S Medium e aggiungi 195 microlitri di brodo batterico nel mezzo S a otto pozzi di una piastra da 96 pozzetti. Lava via i vermi dalla piastra ENGM con mezzo M9. Poi, regola la concentrazione della soluzione di vermi a cinque vermi per microlitro.

Aggiungere 5 microlitri della soluzione di verme a ciascuno dei pozzi della piastra a 96 pozzi. Incubare il piatto su uno shaker e contare il numero di vermi vivi tra 24, 48 e 72 ore.