JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:12 min • February 26th, 2026
Inizia con una piastra di mezzo di crescita per nematodi ricca di nutrienti contenente un prato del batterio patogeno Aeromonas.
Trasferire vermi C. elegans in stadio L4 che esprimono GFP specifico muscolare sul prato batterico e incubare.
I vermi ingeriscono batteri insieme ai nutrienti. Questo permette ai batteri di raggiungere e colonizzare l'intestino.
Utilizzando un sistema specializzato di secrezione, Aeromonas fornisce fattori di virulenza nelle cellule intestinali del verme.
Questi fattori di virulenza diffondono verso la parete corporea, dove disturbano i muscoli, causando danni strutturali e necrosi.
Trasferisci i vermi ogni giorno su un piatto fresco con un prato batterico per mantenere un'esposizione continua ai patogeni.
Posizionare i vermi su un gel di agarosio integrato con un agente anestetizzante per anestetizzarli, poi applicare una copertura.
Utilizzando un filtro GFP, cattura immagini di fluorescenza a intervalli regolari.
La perdita progressiva del segnale GFP indica una rottura muscolare in C. elegans, rappresentando necrosi muscolare indotta da Aeromonas durante l'interazione ospite-patogeno.
Dopo aver coltivato i ceppi di Aeromonas e regolato l'assorbanza secondo il protocollo testo, individuare e diffondere il brodo batterico sulle piastre NGM.
Dopodiché, trasferire 50 vermi L4 su ciascuna piastra NGM. Ogni 24 ore trasferisci i vermi su piastre NGM fresche. Seleziona casualmente 10 vermi e trasferili in un gel di agarosio al 2% in mezzo M9 su un vetrino.
Infine, posiziona una copertura sul gel e cattura immagini muscolari con un filtro proteico fluorescente verde su un microscopio fluorescente dotato di una fotocamera.