JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:11 min • February 26th, 2026
Prendi due piatti contenenti matrici di alginato stampate in 3D, ciascuno che racchiude ceppi batterici di controllo o di test.
Entrambi i ceppi esprimono costitutivamente una proteina fluorescente per la visualizzazione. Il ceppo di prova contiene anche un gene indutibile per la produzione di fibre extracellulari proteiche chiamate fibre curli.
I motivi sono stampati su un substrato solido integrato con calcio e ramnose.
Incubare per permettere agli ioni calcio di reticolare l'alginato, formando un idrogel.
Nella ceppa di prova, la ramnosio induce la produzione di subunità curli, che si auto-assemblano sulla superficie cellulare in fibre.
Usa uno scanner fluorescente per fotografare i motivi.
Trattate con una soluzione chelante del calcio e incubate con agitazioni per sequestrare gli ioni calcio, che interrompono i reticuli di alginato e dissolvendo l'idrogel.
Scartare la soluzione e riimmaginare i pattern.
Il trattamento ha causato la dissoluzione del pattern di controllo, mentre il pattern di prova è rimasto intatto grazie alla rete stabilizzante di fibre curli.
Incubare i campioni stampati a temperatura ambiente per tre o sei giorni per permettere la produzione dei componenti del biofilm, come le fibre di Curli.
Poi, posiziona la piastra su uno scanner fluorescente e immagini le lastre.
Per sciogliere la matrice di alginati, aggiungi 20 millilitri di una soluzione di citrato di sodio 0,5 molari al pH 7 sul substrato stampato, incuba la piastra a temperatura ambiente per due ore scuotendo a 30 rpm.
Poi, scartare il liquido e visualizzare nuovamente le lastre, per confrontare con le immagini delle placche prima e dopo il trattamento con citrato.