Esecuzione di cromatografia a strato sottile per valutare la degradazione degli esopolisaccaridi batterici

Inizia con i soprannatanti fermentati contenenti esosaccacaridi degradati e non degradati, o EPS.

Questi EPS si ottengono durante la fermentazione, quando popolazioni batteriche fecali distinte in ciascun soprantantante agiscono sull'EPS in modo diverso.

Individua i soprannatanti vicino alla base di una piastra cromatografia a strato sottile pre-rivestita con una fase stazionaria polare.

Asciugare la lastra all'aria, poi posizionarla in una camera contenente una fase mobile con polarità inferiore rispetto alla fase stazionaria.

Man mano che la fase mobile sale, gli EPS migrano in base alla loro polarità e dimensione.

Grandi EPS non degradati interagiscono fortemente con la fase stazionaria e rimangono vicino all'origine.

I frammenti degradati più piccoli si legano debolmente e migrano verso l'alto con la fase mobile.

Rimuovi il piatto e asciugalo all'aria.

Immergi la piastra in un reagente che colora i carboidrati e che reagisce con l'EPS.

Asciuga la piastra all'aria, poi scalda per disidratare l'EPS e formare fasce colorate.

Una singola banda vicino all'origine conferma EPS non degradato, mentre più bande confermano la degradazione EPS da parte dei batteri.

Carica 0,2 microlitri dei supernatanti fermentati su ciascuna piastra di alluminio 60 TLC con gel di silice pre-rivestita e fai girare per diffondere. Poi, usa un phon con aria calda per asciugare.

Immergi un'estremità delle piastre campionate in 20 millilitri di acido formico:n-butanolo:soluzione acquosa per diversi minuti, finché l'elettroforesi non si estende quasi all'altra estremità. Poi togli i piastri con la pinza e asciuga con un phon. Poi, immergi le piastre nel reagente orcinol per due minuti per farle tingere e asciugare di nuovo.

Trasferisci i piatti in un forno a 120 gradi Celsius per riscaldarli per tre minuti. Poi scatta foto della piastra per valutare il degrado dell'EPS misurando le bande TLC.