JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 6:21 min. • March 31st, 2026
Inizia con un tampone di agarosio ricco di nutrienti su una struttura metallica contenente batteri che esprimono origini cromosomiche marcate fluorescenti e microsfere fluorescenti.
Il tampone di agarosio supporta l'attacco e la mobilità batterica, e le microsfere fluorescenti servono da riferimento per tracciare la segregazione cromosomica.
Aggiungere olio a immersione alla lente obiettivo nella camera di incubazione preriscaldata di un microscopio a campo ampio invertito.
Posiziona il campione sopra la lente, poi focali su una regione che contiene più batteri e almeno una microsfera fluorescente.
Avviare l'imaging in time-lapse e catturare sia immagini a contrasto di fase che a fluorescenza.
L'origine di replicazione marcata fluorescentmente appare come un ammasso luminoso vicino a un'estremità della cellula.
Durante la divisione, l'origine si duplica; un cluster rimane all'estremità originale mentre l'altro si sposta verso l'estremità della cella appena formata.
Questa configurazione consente di tracciare la segregazione cromosomica su più divisioni e può essere adattata per visualizzare processi dinamici simili in altri batteri, incluse specie patogene durante le interazioni con l'osp
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