JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:30 min. • February 26th, 2026
Posizionare il pesce zebra adulto in acqua di infezione sterile e aggiungere un ceppo patogeno di Vibrio cholerae alla densità desiderata.
Copri il becher con un coperchio perforato per impedire al pesce di saltare fuori e incubare.
I pesci zebra ingeriscono i batteri, che raggiungono l'intestino, si muovono attraverso lo strato muco usando i flagelli e aderiscono all'epitelio.
Colonizzano l'epitelio e secernono tossine che compromettono l'integrità intestinale, causando perdite di ioni, fluidi e proteine.
Le tossine innescano anche la secrezione di muco epiteliale, favorendo la persistenza batterica.
L'accumulo di liquidi, muco e contenuto intestinale provoca diarrea acquosa, rilevabile dall'aumento della torbidità dell'acqua.
Dopo l'incubazione, raccogli i pesci e getta l'acqua infetta in un disinfettante.
Trasferire il pesce in acqua sterile per rimuovere i batteri superficiali.
Raccogli e trasferisci nuovamente il pesce in acqua sterile per ulteriori analisi.
Dopo aver preparato le colture di V. cholerae , inoculare il pesce zebra tramite immersione. Per prima cosa, inserire quattro o cinque pesci zebra in un becher da 400 millilitri contenente 200 millilitri di acqua sterile per infezione. Poi aggiungi 1 millilitro di coltura di V. cholerae per la concentrazione di infezione desiderata.
Poi, copri il becher con un coperchio perforato. Dopo aver preparato tutti i becher, trasferiscili in un incubatore frontale di vetro a 28 gradi Celsius. Per un'esposizione transitoria, dopo circa sei ore, versa l'acqua del becher attraverso una rete per pesca per raccogliere i pesci. L'acqua infetta deve essere smaltita nella candeggina per eliminare i batteri.
Poi, metti il pesce in 200 millilitri di acqua sterile per cinque minuti. Dopo cinque minuti, fai passare quest'acqua attraverso una rete a pesca, gettando l'acqua nella candeggina. Ora, il pesce può entrare in un nuovo becher pulito con 200 millilitri di acqua sterile per l'infezione.