JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:51 min • March 31st, 2026
Fai un inventario di un ceppo resistente agli antibiotici di G. vaginalis, un batterio anaerobico associato a infezioni delle vie urinarie nei topi.
Durante un'infezione iniziale della vescica, E. coli uropatogeno stabilisce serbatoi quiescenti all'interno delle cellule epiteliali della vescica.
L'esposizione successiva a G. vaginalis provoca la sradicazione di cellule superficiali mediata da tossine, permettendo alla riemergenza dell'UPEC dormiente che causa recidiva di infezioni urinarie.
Per preparare l'inoculo di G. vaginalis , sfila il calcio su una piastra di agar nutritiva senza antibiotici per favorire il recupero batterico.
Incubare anaerobicamente per ottenere colonie in crescita attiva.
Trasferire un anello pieno di colonie dense in un brodo nutritivo privo di antibiotici.
Incubare staticamente in condizioni anaerobiche fino a raggiungere la concentrazione batterica desiderata.
Misura la densità ottica per stimare la concentrazione.
Trasferire la sospensione su un tubo, centrifugare per pelletare i batteri, scartare il surnadante e risospendere in un tampon.
Prepara diluizioni seriali e impiattale su substrati contenenti antibiotici per consentire la crescita selettiva di G. vaginalis e prevenire la contaminazione. Contare le colonie per determinare la concentrazione dell'inoculo.
Inizia pedalando con il G. Stiramento vaginale da un brodo congelatore a meno 80 gradi Celsius in una camera anaerobica. Spargere i batteri su una piastra NYCIII senza antibiotici. Incubare la piastra anaerobicamente a 37 gradi Celsius per 24 ore.
Nella camera anaerobica, inoculare cinque millilitri di mezzi anaerobici NYCIII con un anello di un microlitro pieno di cellule dalla placca NYCIII, e incubare la coltura staticamente a 37 gradi Celsius in condizioni anaerobiche per 18 ore. Non includere antibiotici nel mezzo di crescita. Determinare il diametro diametro600 della coltura usando uno spettrofotometro.
Poi, centrifugalo a 9.600 volte g per un minuto e aspira il mezzo. Sospensa il pellet batterico nel PBS alla concentrazione desiderata e diluisci serialmente e placca l'inoculo.