Un modello murino per studiare la transizione patogena di Streptococcus pneumoniae dopo la co-infezione virale

Si inizia con Streptococcus pneumoniae cresciuto in biofilm, un colonizzatore nasofaringeo asintomatico, sospeso in un tampone

Somministrare la sospensione per via intranasale a un topo non anestetizzato, permettendo l'inalazione nelle vie respiratorie superiori.

Nell'epitelio nasofaringeo, i batteri stabiliscono un biofilm che facilita la colonizzazione e sopprime la produzione di citochine antivirali dalle cellule ospiti.

Dopo l'anestetismo, estendi la lingua del topo per accedere alla trachea.

Somministrare il virus dell'influenza A nella trachea per infettare le vie respiratorie inferiori.

Dopo che il topo si è ripreso, vaccinare immediatamente il virus per via intranasale per colpire le vie respiratorie superiori.

L'infezione virale disregola il sistema immunitario dell'ospite e danneggia il tessuto mucoso, scatenando la dispersione batterica nelle vie respiratorie inferiori.

Nell'ambiente polmonare alterato dal virus, i batteri si trasformano in patogeni invasivi, inducendo infiammazione polmonare e diffusione sistemica.

L'infezione sopprime anche la funzione dei neutrofili, riducendo la clearance batterica.

Questo modello di co-infezione consente di indagare le interazioni ospite-microbico.

Scongelare le aliquote coltivate in biofilm sul ghiaccio e centrifugare a 1.700 g per cinque minuti. Rimuovi e scartate con attenzione il surnatant senza disturbare il pellet. Poi, lava il pellet risospendendolo in 1 millilitro di PBS e rifai girare il pellet. Rimuovere il sovrantantante e risospendere il pellet nel volume necessario per raggiungere la concentrazione desiderata.

Inoculare il topo maschio nero C57 sei per via intranasale con unità formative di colonia o CFU da 5 volte 10 alla sesta, pipettando 5 microlitri dell'inoculo diluito in ciascun narido. Dopo l'inoculazione, tieni il topo fermo, stabilizzando la testa fino a quando il volume non viene inalato. Una volta che il virus si è scongelato, diluire il virus nel PBS alla concentrazione desiderata.

Applicare lubrificante oftalmico sugli occhi del topo prima dell'anestesia. Infettare immediatamente il topo anestetizzato con 50 microlitri di 20 unità formanti placca, o PFU, del virus influenzale A o IAV intratracheale, usando pinzette smussate per estrarre la lingua dalla bocca e pipettare il volume di liquido lungo la trachea. Dopo il recupero, inoculare intranasale 10 microlitri di 200 PFU di IAV utilizzando il metodo di inoculazione descritto in precedenza.