JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 4:02 min. • February 26th, 2026
Prendiamo un substrato contenente un antibiotico bloccante la divisione cellulare.
Inoculalo con batteri Gram-negativi a forma di bastoncello.
Incuba con lo scuotito.
In presenza dell'antibiotico, i batteri continuano a crescere senza dividersi e formano lunghi filamenti.
Raccogli la coltura e centrifugala a bassa temperatura. Scartare il soprantantante e lavare i filamenti con una soluzione di saccarosio per prevenire la lisi.
Scartate la soluzione di saccarosio.
Aggiungi un tampone seguito da enzimi ed EDTA. L'EDTA indebolisce la membrana esterna, permettendo al lisozima di entrare e degradare lo strato di peptidoglicano.
Questo rimuove la parete cellulare, permettendo alla cellula batterica di restringersi. La DNasi I rompe il DNA cromosomico rilasciato dalle cellule e previene l'aggregazione cellulare.
Aggiungi una soluzione ipotonica con un leggero vortico, permettendo alla cellula di assorbire acqua.
Le membrane flessibili permettono alla cellula di assumere una forma sferica chiamata sferoplasto.
Trasferire un'aliquota contenente gli sferoplasti in due tubi con una soluzione isotonica raffreddata per stabilizzare gli sferoplasti.
Per preparare gli sferoplasti Gram-negativi di E. coli,
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