JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:34 min. • February 26th, 2026
Prendiamo una femmina di topo colonizzata vaginalmente con Streptococcus del gruppo B o GBS, un patogeno batterico opportunistico del tratto vaginale.
Immobilizza il topo e inserisci un tampone inumidito con il tampone nel lumen vaginale.
Ruota delicatamente il tampone applicando una leggera pressione sulla parete vaginale per spostare i batteri in superficie.
Immergi il tampone in un tampone e agita per sospendere i batteri.
Diluire serialmente la sospensione nel tampone e placcarla su un agar differenziale cromogenico contenente un substrato collegato a un cromogeno.
Incuba per permettere la crescita batterica.
Durante l'incubazione, il GBS esprime un enzima specifico che idrolizza il substrato cromogenico.
Il cromogeno rilasciato subisce ossidazione e dimerizzazione spontanee, formando un composto di colore rosa o malva.
Questo porta a colonie di GBS rosa o malva, visivamente distinte da altre colonie batteriche.
Contare le colonie per quantificare il carico di GBS e valutarne la persistenza nel modello murino.
Poco prima di tamponare, bagna il cotone in PBS e trattieni uno dei topi come appena dimostrato.
Inserire il tampone 10 millimetri nel lumen vaginale e ruotare delicatamente quattro volte in senso orario e quattro volte in senso antiorario, applicando una leggera pressione sulla parete vaginale.
Metti il tampone in un tubo microcentrifuga da 1,5 millilitri contenente 100 microlitri di PBS, e si vortice il tubo e il tampone per circa 15 secondi per liberare i batteri dalle fibre di cotone. Successivamente, diluire serialmente ogni campione in PBS e scartare 20 microlitri da 1 a 10 fino a 10.000 diluizioni su una piastra di agar a mezzo differenziale, preparata secondo le istruzioni del produttore, per l'incubazione a 37 gradi Celsius per 24 ore. Le colonie di GBS appariranno di colore rosa acceso o malva.