Quantificazione del carico di Streptococcus di gruppo B nel lumen vaginale del topo tramite tamponamento e coltura cromogenica

0 visualizzazioni2:34 min • February 26th, 2026

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Prendiamo una femmina di topo colonizzata vaginalmente con Streptococcus del gruppo B o GBS, un patogeno batterico opportunistico del tratto vaginale.

Immobilizza il topo e inserisci un tampone inumidito con il tampone nel lumen vaginale.

Ruota delicatamente il tampone applicando una leggera pressione sulla parete vaginale per spostare i batteri in superficie.

Immergi il tampone in un tampone e agita per sospendere i batteri.

Diluire serialmente la sospensione nel tampone e placcarla su un agar differenziale cromogenico contenente un substrato collegato a un cromogeno.

Incuba per permettere la crescita batterica.

Durante l'incubazione, il GBS esprime un enzima specifico che idrolizza il substrato cromogenico.

Il cromogeno rilasciato subisce ossidazione e dimerizzazione spontanee, formando un composto di colore rosa o malva.

Questo porta a colonie di GBS rosa o malva, visivamente distinte da altre colonie batteriche.

Contare le colonie per quantificare il carico di GBS e valutarne la persistenza nel modello murino.

Poco prima di tamponare, bagna il cotone in PBS e trattieni uno dei topi come appena dimostrato.

Inserire il tampone 10 millimetri nel lumen vaginale e ruotare delicatamente quattro volte in senso orario e quattro volte in senso antiorario, applicando una leggera pressione sulla parete vaginale.

Metti il tampone in un tubo microcentrifuga da 1,5 millilitri contenente 100 microlitri di PBS, e si vortice il tubo e il tampone per circa 15 secondi per liberare i batteri dalle fibre di cotone. Successivamente, diluire serialmente ogni campione in PBS e scartare 20 microlitri da 1 a 10 fino a 10.000 diluizioni su una piastra di agar a mezzo differenziale, preparata secondo le istruzioni del produttore, per l'incubazione a 37 gradi Celsius per 24 ore. Le colonie di GBS appariranno di colore rosa acceso o malva.

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Ultimo aggiornamento: 1 agosto 2026