Quantificazione della soppressione del biofilm indotta da enzimi nei batteri patogeni

Prendere una micropiastra contenente pozzi di controllo e trattamento, ciascuno inoculato con un batterio patogeno biofilmato.

I pozzi di trattamento contengono un enzima che interrompe la formazione di biofilm.

Incubare in condizioni micro-anaerobiche per creare un ambiente a basso contenuto di ossigeno. Questo favorisce la secrezione di molecole di segnalazione batterica che mediano l'adesione superficiale. Nei pozzi di trattamento, l'enzima degrada queste molecole, riducendo così l'attacco batterico.

Lava i pozzi per rimuovere le cellule non aderenti.

Introduci un substrato fresco e incuba. I batteri aderiti proliferano e secernono sostanze polimeriche extracellulari, che formano la matrice di biofilm.

Rimuovi il substrato e lava i pozzi.

Aggiungere un colorante cationico e incubare per permettere il legame ai componenti del biofilm caricati negativamente.

Lava per rimuovere il colorante non legato.

Incubare con un solvente in agitazione per liberare il colorante legato nella soluzione.

Misurare la densità ottica o OD per quantificare la biomassa del biofilm.

Una riduzione del diametro oculare nei pozzi di trattamento riflette una riduzione della formazione di biofilm, risultante da una c