JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:54 min. • February 26th, 2026
Prendiamo pesci zebra selvatici anestetizzati e pesci zebra immunodepressi privi di linfociti.
Posiziona ogni lato ventrale di pesce in una fessura scolpita in una spugna umida per mantenere la vitalità.
Iniettare Mycobacterium marinum nella cavità addominale per stabilire un'infezione sistemica che modella la tubercolosi umana.
Dopo l'iniezione, trasferire i pesci in acqua dolce per il recupero e monitorarli.
Nel pesce selvatico, una risposta infiammatoria forma un granuloma composto da batteri, macrofagi infetti e linfociti. Il granuloma contiene i batteri, impedendone la diffusione.
I linfociti secernono citochine che rafforzano la funzione antimicrobica dei macrofagi, permettendo la morte batterica.
Nei pesci immunocompromessi, il granuloma è privo di linfociti. Di conseguenza, i macrofagi rimangono parzialmente attivati, permettendo ai batteri di sopravvivere, replicarsi e diffondersi, causando mortalità nei pesci.
Genera un grafico di sopravvivenza. L'elevata mortalità nei pesci immunodepressi evidenzia il ruolo dei linfociti nel controllo delle infezioni.
Per prima cosa, pipetta una goccia da 5 microlitri della soluzione batterica diluita su un pezzo di pellicola di paraffina. Poi, tira la goccia in un ago di insulina calibro 30.
Usa un pesce di cinque o otto mesi per questo esperimento, uno è un pesce selvatico e l'altro un pesce mutante di pezza. Posiziona questi pesci con il lato ventrale verso l'alto nelle fessure di un pezzo di plastica umida e schiumosa. Inietta l'ago dell'insulina tra le pinne pelviche con un angolo di 45 gradi.
Mantieni l'ago aperto verso l'alto per assicurarti che l'intera apertura sia all'interno della cavità addominale. Poi, iniettare lentamente la soluzione batterica. Dopodiché, rimuovi con cura l'ago e trasferisci immediatamente il pesce in una vasca di recupero piena di acqua fresca.
Preleva campioni dall'aliquota batterica in uso ogni 15 minuti su piastre 7H10. Incubare questi campioni a 29 gradi Celsius per cinque giorni per verificare la dose di infezione. Controlla regolarmente il benessere dei pesci, assicurandoti di eutanasiare qualsiasi pesce con sintomi di infezione incubandoli in acqua con più dello 0,02% di estere etilico di 3-aminobenzoico.