JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:18 min • March 31st, 2026
Inizia con una piastra di coltura contenente colonie isolate di un batterio del suolo.
Raccogli e vaccina una colonia in una fiaschetta di coltura contenente un mezzo nutritivo.
Incuba la cultura con il scuotimento.
La fiaschetta con sfogo ha creste interne che aumentano la turbolenza durante lo scuotamento, migliorando l'aerazione.
Questo processo garantisce una distribuzione uniforme dell'ossigeno e previene l'aggregazione e la sedimentazione cellulare, permettendo una distribuzione uniforme dei nutrienti.
I batteri si proliferano rapidamente, formando una densa sospensione con cellule che mostrano caratteristiche fisiologiche uniformi.
A intervalli regolari, raccogli un campione in una cuvetta.
Usando uno spettrofotometro, fai passare la luce attraverso il campione. La quantità di luce trasmessa viene misurata per quantificare la crescita batterica, nota come densità ottica o OD.
Selezionare colture batteriche nella fase esponenziale o iniziale stazionaria, poiché le cellule in questa fase sono altamente metabolicamente attive e quindi più suscettibili a infezioni batteriofagiche efficienti.
Le cellule artrobacter vengono coltivate da colonie striate su una piastra agar LB, incubate a 30 gradi Celsius per due o tre giorni.
Usa un anello sterile per scegliere una colonia e aggiungila a 50 millilitri di brodo LB in una fiaschetta di coltura con sparsetti. Incubare la fiaschetta in un incubatore a scuotimento a 225 giri al minuto a 30 gradi Celsius per circa 24 ore per ottenere cellule di fase esponenziali o stazionarie precoce per esperimenti di infezione con fagi.
Monitorare attentamente lo stato della crescita batterica per impedire alle cellule di entrare nello stato di crescita stazionaria medio-tarda. Il diametro dimensionaleideale 600 per l'isolamento dei fagi è compreso tra 0,5 e 0,7.