JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
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Inizia con un topo anestetizzato con un coperchio in piastra di Petri posizionato sotto l'addome per mantenere la schiena orizzontale.
Il topo presenta una ferita da ustione sulla schiena che è stata infettata da Acinetobacter baumannii, un patogeno batterico Gram-negativo.
I batteri sono geneticamente modificati per trasportare un operone bioluminescenze.
Posizionare il topo all'interno di una camera di imaging a bioluminescenza mantenuta a una temperatura ottimale e iniziare l'immagini.
Nel sito di infezione, i geni luxA e luxB dell'operone di bioluminescenza codificano per l'enzima luciferasi. I geni luxCDE codificano enzimi che sintetizzano il substrato della luciferasi.
La luciferasi catalizza l'ossidazione del substrato e produce luce visibile, rendendo i batteri luminescenti.
Il segnale di bioluminescenza indica la presenza di batteri metabolicamente attivi nel sito della ferita.
Utilizzando software di imaging, quantifica l'intensità del segnale di bioluminescenza per stimare il carico batterico vitale.
Immediatamente dopo l'inoculazione, esegui l'imaging bioluminescente avviando il software di imaging in tempo reale. Nel pannello di controllo, clicca su Inizializza. Poi aspetta ch
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