JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:47 min. • March 31st, 2026
Inizia con un vetrino perforato e si applica una biopsia circolare del tessuto sull'area perforata.
Poi, metti sopra una guarnizione in gomma.
Inverti e inserisci questo insieme nella sezione inferiore del telaio della camera di perfusione metallica.
Allinea la struttura superiore con quella inferiore e fissali.
Usa un calibro per confermare l'altezza uniforme della camera.
La camera è collegata a una pompa, che a sua volta è collegata a un serbatoio contenente batteri sospesi in tampon.
Inizia la perfusione della sospensione batterica nella camera.
La perforazione centrale nel vetrino permette l'ingresso della sospensione batterica nell'assemblaggio.
Questo consente l'interazione tra batteri e superficie tissutale, favorendo l'adesione e la colonizzazione.
Questa configurazione genera un modello in vitro che imita la colonizzazione batterica in vivo sul tessuto.
Per iniziare il protocollo, si posiziona una biopsia tissutale preparata in precedenza di 10 millimetri di diametro e dello stesso spessore tra un vetrino del microscopio e una perforazione circolare di otto millimetri, e una guarnizione in gomma con la superficie interna rivolta verso l'alto, per entrare in contatto con la sospensione batterica.
Concentrati sull'orientamento dell'innesto tissutale mentre si è posizionato nel supporto. Assicurati che la superficie interna del tessuto sia già esposta al flusso sanguigno rivolta verso l'alto per entrare in contatto con il tuo mezzo sperimentale.
Successivamente, inserisci il tuo supporto con il fazzoletto nella lastra della guarnizione che è incorporata nel telaio metallico inferiore della camera.
Fissare il telaio metallico superiore con la corrispondente lastra della guarnizione sul fondo della camera con il supporto del tessuto precedentemente inserito. Poi monta tutta la camera con otto viti e dadi per viti. Assicurati che l'altezza della camera sia sempre la stessa tra i trapianti usando un calibro o un righello.
Successivamente collega la camera di flusso con una pompa peristaltica. Poi collega il serbatoio del liquido da 400 millilitri ai tubi. Perfondere i tessuti con sospensioni da 100 millilitri da dieci alle sette unità formative di colonie marcate fluorescenti in soluzione salina tamponata fosfato con lo stress di tre dines per centimetro quadrato e la corrispondente portata di quattro millilitri al minuto per un'ora, utilizzando la pompa peristaltica e il serbatoio batterico. Ricicla continuamente la sospensione batterica da 100 millilitri utilizzando lo stesso serbatoio di raccolta.