JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:30 min • February 26th, 2026
Si inizia con piastre di biosaggio, una pre-colonizzata sul lato sinistro dell'agar nutritivo con Corynebacterium propinquum e l'altra contenente solo agar nutritivo.
Successivamente, si prende una piastra multi-pozzo contenente sospensioni patogeniche di Staphylococcus .
Scendere un timbro di inoculazione nei pozzi, con le punte che si immergono nella coltura Staphylococcus .
Fai roteare il timbro, poi sollevalo e verifica che ogni punta abbia una goccia uniforme per garantire un'inoculazione coerente.
Allinea il timbro con il lato destro della piastra di biosaggio, evitando il contatto con le colonie esistenti.
Rimuovi il timbro, lasciando macchie di Staphylococcus inoculum sull'agar.
Ripeti la stampatura solo sulla piastra di agar per ottenere una monocoltura. Incubare le placche capovolte.
Nella cocultura, C. propinquum secerne siderofori, piccole molecole che recuperano ferro dall'agar, inibendo così la crescita degli Staphylococcus .
Dopo l'incubazione, confrontare la crescita di Staphylococcus nella co-cultura e nella monocoltura.
Un'inibizione significativa nella co-cultura suggerisce un'interazione tra le due specie.
Dopo l'incubazione di sei giorni della piastra di biosaggio, preparare colture notturne dell'organismo bersaglio come descritto in precedenza. Preparare la piastra bersaglio riempiendo ogni pozzo di una piastra vuota da 12 pozzi con 1,8 millilitri di BHI e 200 microlitri della coltura bersaglio durante la notte. Inserire un timbro di inoculazione sterile nella piastra bersaglio.
Fai ruotare delicatamente le colture intorno ai pozzi, assicurandoti che non contaminino incrociati i pozzi vicini. Solleva il timbro di inoculazione e assicurati che ci sia una goccia di coltura bersaglio diluita su ogni punta del timbro. Posiziona il timbro di inoculazione su una piastra biotest non inoculata e dondola delicatamente il timbro in modo che la goccia di coltura inoculi ogni pozzo.
Una volta rimosso il timbro, una goccia di coltura dovrebbe essere visibile nei pozzi. Se non ci sono pozzi inoculati con il timbro di inoculazione, si posizionano 3 microlitri di coltura diluita durante la notte sui pozzi usando una pipetta. Poi, inocula le piastre del biosaggio come descritto in precedenza, ma allinea le punte del timbro con il lato destro della piastra a 12 pozzetti, assicurandoti che il timbro non entri in contatto con la colonia batterica esistente. Rimuovi con cura il timbro e rimettilo nella piastra di bersaglio.
Se l'agar si è solidificato nei pozzi in modo irregolare, dondola delicatamente il timbro avanti e indietro, ma fai attenzione a non spostare il timbro nella crescita dell'organismo testato.
Ripetere l'inoculazione per ogni piastra di bioanalisi fino a quando tutte le placche non sono inoculate, poi incubare le placche capovolte alla temperatura appropriata per sette giorni.
Dopo aver co-coltivato il test e l'organismo bersaglio per una settimana, valuta le interazioni sulla base della valutazione visiva. Valutare i pozzi con la crescita dell'organismo bersaglio che mostra una crescita indistinguibile rispetto alla monocoltura come zero. Valuta i pozzi con crescita diminuita come uno, e nessuna crescita come due.