Immunocolorazione di microlesioni piene di batteri in una sezione di tessuto cardiaco di topo per l'imaging

Inizia con un vetrino contenente una sezione di tessuto cardiaco fissata chimicamente da un topo infetto da Streptococcus pneumoniae, un batterio patogeno.

Questa infezione provoca la formazione di microlesioni extracellulari piene di batteri all'interno dei muscoli cardiaci.

Lava la sezione con un tampone per rimuovere eventuali residui di fissazione.

Applicare un detersivo non ionico per permeabilizzare le membrane cellulari dell'ospite.

Lava di nuovo per eliminare eventuali residui di detersivo.

Incubare la sezione con un agente bloccante per bloccare i siti di legame non specifici.

Sciacquare per rimuovere l'agente bloccante non legato.

Introdurre un anticorpo primario che si lega al polisaccaride capsulare del batterio.

Lavare per rimuovere qualsiasi anticorpo non legato, poi aggiungere un anticorpo secondario verde marcato con fluoroforio che si lega all'anticorpo primario.

Controcolorare con un colorante nucleare per contrassegnare i nuclei della cellula ospite.

Lava la sezione e montala usando un mezzo di montaggio.

Osserva la sezione usando microscopia confocale per visualizzare i batteri marcati all'interno delle microlesioni.

Utilizzando una sezione cardiaca da 5 micron su vetrine d