Rilevamento basato su PCR di patogeni alimentari da campioni di mosca arricchiti

Posizionare i tubetti a reazione a catena della polimerasi o PCR contenenti compresse pronte per PCR specifiche per i patogeni alimentari target su un rack refrigerato per tubi PCR.

Ogni compressa include primer specifici per target, DNA polimerasi, dNTP e un colorante fluorescente utilizzato nella reazione PCR.

Aggiungi un lisato di mosca arricchito contenente una grande quantità di DNA proveniente da batteri patogeni per formare la miscela di reazione.

Sigilla i tubi con tappi ottici per evitare l'evaporazione.

Caricare i tubi PCR nel termociclatore ed eseguire esecuzioni PCR separate utilizzando programmi specifici per il patogeno per ciascun patogeno bersaglio.

Durante la PCR, il DNA si denatura, i primer si legano alla sequenza bersaglio e l'amplificazione produce DNA a doppio filamento che lega il colorante ed emette fluorescenza.

I cicli ripetuti portano a un'amplificazione esponenziale del DNA e a un aumento della fluorescenza.

Lo strumento monitora la fluorescenza in tempo reale per rilevare la presenza dei patogeni alimentari bersaglio nel campione.

Per iniziare la rilevazione basata su PCR, prima raffredda un rack per tubi PCR su un blocco di raffreddamento. Successivamente, ins