JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:33 min. • February 26th, 2026
Inizia con le lastre contenenti batteri attaccati alla superficie e batteri planctonici o liberi.
Aggiungi cellule di ameba a entrambi i campioni.
Posizionare un tampone di agarosio contenente Calcein-AM, un colorante permeabile alle cellule, su ciascun campione.
Rimuovere il liquido in eccesso, lasciarlo asciugare e incubare i piatti.
Nella placca con batteri attaccati alla superficie, il contatto superficiale regola al massimo i geni della virulenza, esprimendo tossine.
Queste tossine interrompono la membrana dell'ameba e ne cambiano la forma.
La membrana amebaica danneggiata permette a più calcina-AM di entrare nel citoplasma, dove le esterasi intracellulari li dividono nella calcina fluorescente, portandone l'accumulo.
Al contrario, i batteri planctonici, privi di contatto superficiale, rimangono non virulenti, lasciando intatte le membrane delle amebe. Questo riduce l'ingresso di Calcein-AM nell'ameba, limitando l'accumulo di calceina fluorescente.
Le ameba sane inghiottono anche i batteri non virulenti.
Al microscopio fluorescente, cellule di amebe luminose e arrotondate indicano un'interazione batterica virulente, mentre le ameba fioche e amorfe indicano un'interazione batterica non virulenta.
Per analizzare la virulenza delle cellule batteriche attaccate superficialmente, aggiungere 10 microlitri di cellule di ameba provenienti dalle cellule batteriche attaccate in superficie precedentemente.
Per isolare le cellule planctoniche, trasferire 10 microlitri della coltura in una piastra di Petri fresca.
Successivamente, si analizza la virulenza delle cellule planctoniche mescolando 10 microlitri di cellule amebe con i batteri planctonici già ottenuti.
Posiziona immediatamente il piccolo tampone agario sopra la miscela adatta di batteri e ameba sulla superficie della piastra di Petri.
Poi, rimuovi il liquido in eccesso pipettando delicatamente l'eccesso e lascia asciugare il piatto per 20 minuti.
Copri la teglia con il coperchio e lasciala incubare a temperatura ambiente per altri 40 minuti. Infine, utilizzare un microscopio a fluorescenza per acquisire immagini di almeno 100 cellule di ameba.