JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:03 min • February 26th, 2026
Inizia con una milza di topo pre-infettata da batteri patogeni.
Inserire la milza in soluzione salina fredda tamponata con fosfati per preservare la vitalità batterica.
Utilizzando un omogeneizzatore, omogeneizzare la milza per disturbarla meccanicamente e liberare i batteri intracellulari nel tampon.
Questo genera una sospensione batterica che riflette il carico batterico totale all'interno della milza.
Eseguire diluizioni seriali dell'omogeneato per ridurre la densità batterica nella soluzione e determinare accuratamente il conteggio batterico.
Successivamente, prendi una piastra di agar nutritivo divisa in due sezioni.
Applica la stessa diluizione batterica su ogni sezione della piastra di agar per generare repliche.
Lascia asciugare il piatto, poi capovolgi e incuba. Durante l'incubazione, i batteri vitali si moltiplicano e formano colonie distinte.
Contare le colonie di ciascuna sezione della piastra per calcolare le unità medie di formazione di colonie, o CFU, che rappresentano il carico batterico totale nella milza durante l'infezione.
La milza in un tubo da 15 millilitri contenente due millilitri di PBS. Successivamente, si utilizzano omogeneizzatori monogetabili individuali per campione per macerare i tessuti sul ghiaccio, seguiti da una diluizione seriale delle sospensioni tissutali.
Impiatta le diluizioni, in duplicato, su lati separati di una singola piastra TSA e lascia asciugare brevemente i campioni. Poi, inverte le piastre e si coltura i campioni in un incubatore statico a 37 gradi Celsius durante la notte, facendo la media delle colonie batteriche da entrambi i lati della piastra e da ogni diluizione la mattina seguente.