Imaging confocale di biofilm batterici indotti da filtrati dell'expectorato in pazienti con fibrosi cistica
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:32 min. • February 26th, 2026
Incubare un coverglass a camera contenente batteri aderiti in un mezzo integrato con filtrato di sputo, derivato dal paziente, e solo nel mezzo.
Il filtrato di spettorato contiene componenti derivati dall'ospite che stimolano le vie di segnalazione batterica, innescando la produzione della matrice e la formazione di biofilm.
Una volta formati i biofilm, si scarta il mezzo contenente batteri liberi e componenti residui derivati dall'ospite.
Lava con un tampone per rimuovere i batteri attaccati debolmente.
Aggiungi una miscela colorante contenente coloranti fluorescenti permeabili alla membrana e impermeabili alle membrane, e incuba al buio.
Il colorante permeabile alla membrana attraversa membrane intatte, segnando sia batteri vitali che non vitali. Al contrario, il colorante impermeabile entra solo nelle membrane danneggiate, etichettando selettivamente i batteri non vitali.
Dopo l'incubazione, rimuovere la soluzione di colorazione e lavare con il tampone per eliminare il colorante in eccesso e ridurre la fluorescenza di fondo.
Aggiungi nuovo mezzo e acquisisci immagini usando microscopia confocale.
I biofilm coltivati con filtrato di espettoro mostrano uno spessore aumentato, evidenziando
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