Trattamento attivato dalla luce dei biofilm batterici utilizzando un precursore fotosensibilizzatore

Si inizia con pozzi a microplacche contenenti biofilm di un batterio patogeno, suddivisi in quattro gruppi sperimentali.

Aspirare delicatamente il substrato e risciacquare con un tampone per rimuovere le cellule non aderenti.

Aggiungere un buffer contenente un precursore del fotosenziatore a due gruppi, mentre i restanti due ricevono solo il buffer.

Incubare tutti i gruppi al buio per permettere al precursore di diffondersi attraverso il biofilm, entrare nelle cellule batteriche e metabolizzarsi in un fotosensibilizzatore che si accumula nel citoplasma e nelle membrane.

Dopo l'incubazione, esporre un gruppo trattato con precursore e un gruppo solo tampone all'irradiazione luminosa.

Nel gruppo trattato con precursori, la luce eccita il fotosensibilizzatore, che trasferisce energia all'ossigeno molecolare e genera specie reattive di ossigeno (ROS).

Gli ROS disturbano le membrane, degradano proteine e frammentano il DNA, causando la morte cellulare batterica.

Le altre tre condizioni non producono ROS, poiché o il precursore o la luce sono assenti, lasciando il biofilm intatto.

Per generare un biofilm in una piastra da 96 pozzi, prima inoculare uno a meno 80 gradi Celsius ha scongelato Staphyl