Preparazione del campione e imaging di batteri marcati con fluorescenza

Inizia con una grande vetrina di vetro con vetrine più piccole posizionate su ciascun bordo in un doppio strato.

Versa agarosio fuso nello spazio e coprilo con un altro grande vetrino di vetro.

Raffredda il setup per solidificare l'agarosio.

Rimuovi i vetri e taglia l'agarosio in piccoli cuscinetti.

Metti i cuscinetti di agarosio all'interno di una cornice adesiva fissata a una carrella.

Prendi una coltura di batteri patogeni, geneticamente modificati per esprimere un sistema di secrezione marcato fluorescente, essenziale per l'infezione dell'ospite.

Usa una chiazza batterica densa e sospesa in acqua.

Vortice per disperdere i batteri in modo uniforme.

Applica la sospensione sul cuscinetto di agarosio per immobilizzare i batteri.

Sigilla con una copertura per mantenere l'idratazione.

Sotto illuminazione a campo chiaro, seleziona un campo di celle per l'immagini.

Ottimizzare le impostazioni del microscopio per ridurre il fotosbiancamento e aumentare la sensibilità del segnale.

Passa al canale di fluorescenza per rilevare i batteri con marcatura fluorescente.

Inizia realizzando cuscinetti di agarosio per l'imaging delle cellule vive. Prepara circa 30 millilitri di soluzione di agarosio a bassa fum