Imaging ad alto rendimento dell'infezione intracellulare da Brucella abortus nelle cellule epiteliali dell'ospite

Si inizia dalle cellule epiteliali in cui l'espressione della proteina adattatrice dell'interferone, un mediatore chiave dell'immunità innata, è stata ridotta, rendendo le cellule più suscettibili all'infezione da Brucella .

Sostituire il mezzo con un mezzo infettivo contenente Brucella abortus espressa da proteina fluorescente verde e patogeno intracellulare facoltativo, alla concentrazione desiderata.

Centrifugare la piastra per favorire il contatto tra batteri e cellule ospiti, poi incubare per permettere l'internalizzazione batterica.

Lavare le cellule con un mezzo contenente siero e trattale con un antibiotico per eliminare i batteri extracellulari.

Incubare ulteriormente per permettere a Brucella di moltiplicarsi intracellulare.

Lavare le cellule con il tampone e fissarle con paraformaldeide per preservare le strutture intracellulari.

Risciacqua via il fissativo in eccesso. Poi, aggiungi un tampone integrato con detersivo per permeabilizzare le cellule.

Lava via il detersivo residuo, poi aggiungi DAPI per macchiare i nuclei e effettua un lavaggio finale.

Utilizzando un microscopio automatizzato, acquisire immagini ad alto rendimento dell'infezione da Brucella nelle cellule epiteliali