JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:32 min • March 31st, 2026
Si inizia con le piantine di Arabidopsis thaliana coltivate su supporti a rete a bassa densità che galleggiano sulla superficie di un mezzo di crescita liquido in un sistema privo di suolo.
Queste piantine sono state pre-inoculate con batteri che colonizzano la radice e formano un biofilm.
Tieni la piantina e pizzica delicatamente il fusto sotto le foglie con una pinza.
Poi, solleva la piantina dalla rete senza danneggiare la radice, preservando la struttura radicale colonizzata.
Trasferire la piantina su una piastra multi-pozzo contenente acqua doppiamente distillata.
Copri la piastra con una lamina e sonica i campioni usando un sonicatore multipunte per disturbare il biofilm e spostare i batteri dalla superficie radicale.
Dopo la sonicazione, utilizzare la sospensione batterica sonicata per preparare diluizioni seriali.
Impiatta i campioni diluiti su piastre di agar e aggiungi delle perline di vetro per distribuire uniformemente i batteri.
Rimuovi le perline e incuba le piastre per permettere ai batteri vitali di formare colonie.
La formazione della colonia conferma la colonizzazione radicale di successo da parte dei batteri nel sistema senza suolo.
Dopo lo sciacquamento, rimuovi le piantine dalla rete posizionando delicatamente le pinze sterilizzate a fiamma sotto le foglie, sul lato della rete. Pizzica leggermente il gambo e muovi le piantine verso l'alto e lontano dalla rete per staccare la radice senza romperla. Per rimuovere i batteri dalle radici delle piante, trasferire le piantine di ogni rete in singoli pozzi di una piastra di sonicazione a 24 pozzi contenente un millilitro di acqua doppiamente distillata.
Sonica tutti i campioni all'interno della placca contemporaneamente, usando un sonicatore multi-punte come descritto nel manoscritto. Per quantificare i batteri, si esegue diluizioni seriali di 10 volte dei campioni sonicati nel mezzo di crescita batterico. Diffondi usando perline di vetro sterili e incuba alla temperatura ottimale per i batteri finché le singole colonie non saranno numerabili.