Rilevamento della suscettibilità agli antibiotici batterici utilizzando un microscopio a scattering Raman stimolato

Inizia con campioni batterici pretrattati con concentrazioni crescenti di un antibiotico che elimina i batteri suscettibili.

Aggiungi un mezzo di crescita contenente ossido di deuterio e la stessa concentrazione di antibiotico ai tubi corrispondenti.

Incubare i tubi in condizioni di scuotere.

L'ossido di deuterio entra nelle cellule batteriche, dove il deuterio viene incorporato nelle biomolecole appena sintetizzate, formando legami carbonio-deuterio.

Centrifuga i batteri, elimina il soprantantante e lava il prodotto.

Aggiungi un fissativo per preservare la struttura batterica.

Aggiungi acqua, centrifuga e rimuovi il surnadante.

Risospendi i batteri e trasferisci la sospensione su un vetro di copertura rivestito in poli-L-lisina, poi sigillalo.

Posizionare il campione sul palco di un microscopio Raman a scattering stimolato pre-calibrato o SRS. Aggiungi acqua e abbassa l'obiettivo.

Acquisire immagini di più campi per valutare la frequenza vibrazionale carbonio-deuterio.

A concentrazioni più elevate di antibiotici, il segnale carbonio-deuterio diminuisce, indicando una diminuzione della vitalità batterica.

Ciò consente una valutazione rapida della suscettibilità agli antibiotici correlando l'i