JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:29 min • March 31st, 2026
Prendi una goccia di un patogeno batterico su un film di paraffina.
Inserisci una larva di Drosophila nella goccia batterica.
Al microscopio stereomicroscopio, si utilizza un ago di tungsteno per pungere la larva e perforare la cuticola, lo strato protettivo esterno e l'epidermide sottostante.
Questo permette l'ingresso dei batteri nell'emolinfa larvale, il liquido circolatorio.
Trasferire le larve infette su una piastra agar scanalata e ricca di nutrienti contenente pasta di lievito come fonte di cibo.
Le scanalature facilitano la migrazione larvale e prevengono la disidratazione.
Aggiungi la sospensione batterica rimanente alla piastra e sigillala con una pellicola di paraffina.
Incubare la piastra in una camera umida per mantenere la vitalità larvale.
All'interno dell'emolinfa larvale, cellule immunitarie chiamate emociti rilevano i batteri e avviano la fagocitosi.
Mentre alcuni batteri vengono eliminati dopo la fusione fagosoma–lisosoma, altri sopravvivono ritardando la fusione o resistendo allo stress intracellulare e si replicano all'interno degli emociti, portando a un'infezione intracellulare prolungata.
Le Drosophila larvae infette sono ora pronte per studi di interazione ospite-patogeno.
Mettere la pasta di lievito su un piatto di agar di succo d'uva. Fai un taglio fine nell'agar dove le larve possono migrare per evitare l'asciugatura.
Assemblare un ago di tungsteno da 0,001 millimetri con pinze di contenimento usando pellicola di paraffina. Pipetta 50 microlitri di C ad alto titolo e mCherry-expressing. Burnetii sul film di paraffina sotto il microscopio stereoscopico e posizionare le larve nella piscina di batteri. Pungi le larve con un ago di tungsteno.
Trasferire le larve su una piastra di agar. Trasferire il residuo del materiale patogeno sulla piastra di agar e sigillare la lastra con pellicola di paraffina. Tieni le larve sul piatto nell'aria umida fino al tempo desiderato dopo l'infezione. Lascia la C. Burnetii ha infettato le larve sulla piastra per 24 ore.