Modello intestinale in vitro per valutare l'adesione batterica e l'internalizzazione

Si inizia con un inserto Transwell contenente una co-coltura di cellule epiteliali e simili a un calice.

Le cellule epiteliali formano giunzioni strette, mentre le cellule simili a calice producono muco, replicando la barriera epiteliale intestinale in vivo.

Assumi una sospensione della comunità batterica orale trattata con liquido intestinale simulato per imitare la digestione dell'intestino tenue.

Sostituisci il substrato nella camera superiore con la sospensione batterica.

Incubare con scuotimento per facilitare l'adesione e l'internizzazione batterica.

Raccogliere il materiale dalla camera superiore contenente batteri non aderenti per i successivi saggi di vitalità.

Aggiungi una soluzione dissolvente del muco e incuba per solubilizzare il muco e liberare i batteri aderiti.

Raccogliere la soluzione per un'ulteriore analisi della vitalità e aderenza batterica.

Lava le cellule con un tampone e aggiungi un detersivo per spostarle.

Raccogli la sospensione della cella.

Vortice la sospensione per lisare le cellule e liberare i batteri interiorizzati.

Centrifugare e raccogliere separatamente il soprannatante e i detriti cellulari per ulteriori analisi.

Dopo aver lavato e regolato la densità cellul