JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 5:12 min. • March 31st, 2026
Inizia con piccoli frammenti di tessuto fogliare raffreddato in cui il floema è infettato da un patogeno batterico.
Inserire i pezzi in una malta con azoto liquido per inibire l'attività delle nucleasi degradanti il DNA.
Macinare per disturbare meccanicamente le cellule e liberare componenti intracellulari.
Usa una spatola raffreddata per trasferire la polvere, aggiungi il tampone di lisi e trasforma la sospensione in un vortice.
Incubare per lisare nuclei vegetali e cellule batteriche, rilasciando DNA e RNA mentre denaturano le proteine.
Aggiungi RNasi e incuba per degradare l'RNA.
Aggiungi un tampone di precipitazione proteica alle proteine aggregate, poi centrifuga per separarle.
Trasferire il DNA vegetale e batterico contenente il sovrandanante in isopropanolo per precipitare il DNA come filamenti filiformi.
Centrifuga per raccogliere DNA e scartare il soprantantante.
Lava con etanolo, poi centrifuga e scarta il soprantantante.
Asciuga il DNA all'aria, poi aggiungi un tampone di reidratazione e incuba per scioglierlo.
I campioni di DNA sono ora pronti per la rilevazione a valle di patogeni basata su PCR.
Usa forbici pulite per tagliare una foglia intera e fresca da un albero di agrumi e me
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