Dissezione di Human Elements corpo vitreo per l'analisi proteomica
23 gennaio 2011
Questo video mostra una tecnica efficace per differenziare e sezionare le varie semitrasparente strutture del corpo vitreo in post mortem occhi.
Il vitreo è una matrice extracellulare otticamente trasparente che riempie l'interno dell'occhio. Può essere suddiviso in diverse sottotramature, tra cui l'ialoide anteriore dietro al cristallino, la base vitreale alla retina anteriore, la corteccia vitreale che forma un involucro elastico e il nucleo vitreale al centro. Per dissezionare il vitreo, dobbiamo prima rimuovere il segmento anteriore.
Si utilizza una lama estremamente affilata per incisionare la cornea al limbo. Successivamente si usano forbici corneo-sclerali per tagliare la cornea appena anteriormente al limbo. L'iride viene dissezionata con forbici curve tirandola dalla sua superficie.
Applicando una pressione delicata sul globo oculare è possibile espellere il nucleo. Per rimuovere il nucleo vitreo, utilizzare un ago da 23 gauge su una siringa da 5 cc ed aspirare il vitreo prevalentemente liquido. L'ialoide anteriore diventa visibile come una sottile struttura membranosa trasparente che può essere afferrata con una pinzetta.
È una struttura elastica situata appena dietro la lente. Il cerchio interno è il legamento di Wit. Le forbici di Van vengono utilizzate per tagliare l'ialoide mentre la pinza applica trazione.
Il tessuto lat può essere trasferito in un tubo afu e la manovra viene ripetuta fino a quando tutto il tessuto è stato dissezionato. Per accedere alle restanti sottotramature vitreali, è necessario aprire l'occhio utilizzando forbici curve di Westcott. Ognuno dei lembi viene deviato con pinzette in una piastra di Petri.
Questa immagine mostra l'anatomia della base vitrea, un tessuto sottile e trasparente che si estende lungo la ora serrata. La ora serrata è la linea di demarcazione tra il corpo ciliare in posizione anteriore e la retina in posizione posteriore. A differenza di altre parti del vitreo, la base vitrea aderisce saldamente al corpo ciliare e alla retina sottostanti, pertanto una trazione con pinze solleva effettivamente il tessuto.
Per isolare la base vitrea, rimuoviamo innanzitutto la pars plana utilizzando pinzette e forbici di Wescott. La pars plana è questa piccola area con delle creste. Successivamente, per isolare la base vitrea, effettuare un taglio da due a tre millimetri posteriormente all'ora con le forbici di Wescott, stabilizzando l'occhio con le pinzette, quindi afferrare e applicare trazione sulla base vitrea utilizzando le pinzette ed effettuare tagli consecutivi con le forbici di Wescott.
Si osserva un aspetto simile a una collana di perle quando la base vitrea viene escissa, e si può notare come questa matrice extracellulare possa compartimentalizzare le proteine. Diverse tecniche possono essere utilizzate per dissezionare l'involucro del vitreo. Il contatto con una spugna cellulare WEX solleverà la corteccia.
Un margine della corteccia vitrea può essere individuato tra i lembi come mostrato qui. Nuovamente, utilizzare la pinza per creare trazione e recuperare le forbici di VanNess per tagliare in successione la corteccia vitrea. La corteccia può anche essere sollevata dal disco ottico e, in questo caso, vengono impiegate forbici westcot più grandi per dissezionare la corteccia mentre viene delicatamente staccata dalla superficie della retina.
I campioni possono quindi essere posizionati in un micro e conservati per successive analisi proteomiche.
Panoramica
Questo video illustra una tecnica per differenziare e dissezionare le strutture semitrasparenti del corpo vitreo umano in occhi post mortem. Il processo prevede una dissezione accurata per evidenziare le diverse sottot strutture all'interno del vitreo.
Componenti Chiave dello Studio
Area della Scienza
- Neuroscienze
- Oftalmologia
- Organizzazione dei tessuti
Sfondo
- Il vitreo è una matrice extracellulare otticamente trasparente presente nell'occhio.
- È composto da diverse sottot strutture, tra cui l'ialoide anteriore e la base vitreale.
- Comprendere l'anatomia del vitreo è fondamentale per diversi studi oculari.
- Le tecniche di dissezione sono essenziali per isolare queste strutture ai fini dell'analisi.
Scopo dello studio
- Dimostrare tecniche di dissezione efficaci per il corpo vitreo.
- Migliorare la comprensione dell'anatomia del vitreo.
- Preparare campioni per ulteriori analisi.
Metodi Utilizzati
- Rimozione del segmento anteriore mediante lama estremamente affilata.
- Dissezione dell'iride e del nucleo vitreo mediante forbici e pinze specializzate.
- Taglio sequenziale della base e della corteccia vitrea con strumenti di precisione.
- Raccolta del campione per analisi proteomica.
Risultati principali
- L'ialoide anteriore è identificato come una sottile membrana trasparente.
- La base vitrea è isolata e presenta un aspetto a collana di perle.
- Diverse tecniche dissecano efficacemente la corteccia vitrea.
- I campioni sono preparati per futuri studi proteomici.
Conclusioni
- Le tecniche mostrate sono efficaci per dissezionare il corpo vitreo.
- La comprensione dell'anatomia vitrea è utile per la ricerca oculare.
- I metodi di dissezione appropriati sono fondamentali per l'integrità del campione.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Progetto
La dissezione precisa e la compartimentalizzazione delle sottotramature vitreali umane permettono un profilo proteomico fondamentale per comprendere i meccanismi delle malattie nei disturbi retinici e vitreoretinici. Questo flusso di lavoro supporta l'identificazione e la validazione precoce di bersagli rivelando firme proteiche uniche all'interno di distinti compartimenti della matrice extracellulare. L'approccio aumenta la sicurezza predittiva nella ricerca traslazionale e nella selezione di portafogli nella scoperta di farmaci oftalmici.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione del Target
- Consente l'isolamento di substrutture vitreali distinte per analisi proteomiche mirate a ipotesi specifiche.
- Permette l'identificazione di proteine candidato specifiche dei compartimenti implicati nelle patologie retiniche.
- Facilita la riduzione del rischio meccanicistico chiarificando l'eterogeneità molecolare all'interno della matrice oculare.
- Migliora la fiducia predittiva nella selezione di bersagli rilevanti per le malattie nei percorsi di sviluppo oftalmologico.
Sviluppo di Screening e Saggi
- Fornisce campioni di tessuto validati per saggi proteomici quantitativi successivi.
- Permette la preparazione riproducibile di matrici biologiche per la standardizzazione dei saggi.
- Supporta lo sviluppo di piattaforme di screening mirate a profili proteici compartimentalizzati.
- Migliora l'affidabilità della valutazione dei composti garantendo l'integrità e la specificità del campione.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Allinea i risultati proteomici ai biomarcatori rilevanti per la malattia, garantendo continuità traslazionale.
- Permette l'avanzamento dei bersagli candidati nella validazione preclinica, adeguato al rischio.
- Supporta studi meccanicistici che collegano la composizione molecolare ai fenotipi della malattia.
- Facilita l'integrazione trasversale tra team di ricerca scoperta e ricerca traslazionale.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Questo protocollo di dissezione e di analisi proteomica collega la fase iniziale della scoperta alla ricerca traslazionale, consentendo un'analisi molecolare specifica per compartimento del corpo vitreo umano.
- Biologia della scoperta: Supporta la verifica delle ipotesi e la chiarificazione dei percorsi mediante l'isolamento di compartimenti proteici unici.
- Screening: Fornisce campioni riproducibili e ben caratterizzati per saggi proteomici quantitativi.
- Analisi: Consente profili proteici distinti per analisi comparative tra sottotrami vitreali.
- Ricerca traslazionale: Collega i riscontri molecolari ai meccanismi delle malattie e allo sviluppo di biomarcatori.
- Riutilizzo aziendale: Stabilisce un protocollo standardizzato per un uso ripetuto in programmi di R&S oftalmica.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Aumenta la fiducia predittiva e riduce l'ambiguità meccanicistica nella validazione degli obiettivi.
- Valore operativo: Migliora la riproducibilità e la standardizzazione della preparazione dei tessuti per flussi di lavoro proteomici.
- Valore strategico: Orienta le decisioni di avanzamento o interruzione e migliora l'efficienza nell'uso del capitale nei portafogli di scoperta oftalmica.
- Impatto sul portafoglio: Permette una priorizzazione adeguata al rischio degli obiettivi basata su evidenze molecolari specifiche per compartimento.
Considerazioni sull'implementazione
- Richiede competenze specifiche nell'anatomia oculare e nelle tecniche di microdissezione.
- Presuppone l'accesso a strumenti specializzati per dissezione e a infrastrutture per l'analisi proteomica.
- Necessita di una rigorosa standardizzazione tra i diversi gruppi di lavoro per garantire una preparazione campionaria riproducibile.
- Potrebbe richiedere adattamenti per diverse specie o modelli di malattia, in base al tessuto disponibile.
- L'integrità del campione e la specificità del compartimento sono fondamentali per la validità analitica successiva.
