JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:22 min. • August 31st, 2026
Iniziare con una fiala da coltura contenente cellule renali embrionali umane in un mezzo ricco di nutrienti.
Sostituire il mezzo con del mezzo fresco contenente cloroquina per migliorare il trasferimento del plasmide nelle cellule.
Prelevare una miscela di plasmidi che codificano le proteine di superficie dell'influenza, le proteine core del lentivirus e il genoma del lentivirus, insieme al fosfato di calcio. Incubare per formare complessi di DNA con fosfato di calcio.
Aggiungere la miscela alle cellule e mescolare delicatamente. Incubare per consentire l'ingresso del complesso nelle cellule mediante endocitosi. Il cloroichina favorisce l'uscita plasmidica dagli endosomi.
All'interno della cellula, il DNA plasmidico induce l'espressione di entrambi i componenti influenzali e lentivirali.
Sostituire il mezzo per rimuovere i complessi in eccesso.
Incubare per permettere l'assemblaggio dei componenti virali e il rilascio come pseudovirus, che vengono secreti nel mezzo di coltura.
Raccogliere il mezzo contenente i pseudovirus e centrifugare per formare un pellet di detriti cellulari.
Raccogliere il surnatante contenente il pseudovirus e conservarlo a basse temperature per saggi successivi.
Per
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