Produzione e purificazione di particelle ricombinanti del virus dell'epatite B

Iniziare con epatociti coltivati su una piastra rivestita di collagene.

Introdurre un complesso di reagente per la trasfezione con due plasmidi: uno che contiene un genoma modificato del virus dell'epatite B o HBV, e l'altro che codifica per le proteine strutturali virali.

Incubare per consentire l'ingresso del plasmide. All'interno della cellula, i geni virali vengono espressi per produrre proteine strutturali e un genoma HBV modificato, che si assemblano per formare particelle di HBV ricombinante.

Sostituire il mezzo e incubare per favorire la produzione e il rilascio delle particelle virali.

Raccogliere il mezzo e centrifugare per ottenere un pellet dei detriti.

Raccogliere il sopernatante e filtrarlo per rimuovere i detriti rimanenti.

Successivamente, aggiungere polietilene glicole e cloruro di sodio per precipitare le particelle virali.

Centrifugare per ottenere il pellet del contenuto. Sciogliere il pellet in tampone e centrifugare per rimuovere i detriti. Successivamente, stratificare il campione su un cuscino di saccarosio.

Eseguire l'ultracentrifugazione per sedimentare le particelle virali attraverso l'ammortizzatore.

Rimuovere il soprannatante e risospendere il pellet nel mezzo.

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