JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:29 min • August 31st, 2026
Prendere larve di zanzara di primo stadio, che sono suscettibili all'infezione virale.
Trasferire i larvi in un becher contenente acqua deionizzata.
Introdurre il densovirus ricombinante, modificato per codificare un microRNA che sopprime i geni larvali bersaglio. Incubare.
I larve assorbono il virus, che successivamente raggiunge l'intestino.
Il virus ingerito attraversa l'epitelio intestinale e si diffonde ad altri tessuti.
Il virus entra nelle cellule larvali tramite endocitosi e rilascia il suo DNA nel nucleo.
Il DNA virale produce microRNA.
Nel citoplasma, questi microRNA si legano al complesso di silenziamento indotto dall'RNA.
Il complesso si lega e scinde gli mRNA larvali complementari del bersaglio, impedendone l'espressione e portando al silenziamento genico.
Dopo l'incubazione, lavare le larve con acqua deionizzata per rimuovere le particelle virali non ingerite.
Trasferire i larvi in una nuova piastra con cibo per il recupero.
I larve di zanzara infette dal virus, con il gene bersaglio silenziato, sono pronte per le applicazioni successive.
Lavare 100 larve di prima instar di A. albopictus tre volte, utilizzando acqua deionizzata. Successivamente, trasferire le larve in un becher contenente 95 millilitri di acqua deionizzata.
Aggiungere cinque millilitri delle scorte di rAaeDV e incubare le larve per 24 ore a 28 gradi Celsius. Per il successo dell'infezione delle larve, è essenziale che le larve siano esposte alle particelle virali per un periodo di 24-36 ore per garantire alti tassi di infezione. Al termine dell'incubazione, lavare le larve tre volte con acqua deionizzata, quindi trasferirle nuovamente nelle piastre. Nutrire le larve regolarmente.