JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:28 min. • August 31st, 2026
Prelevare una coltura di batteri spirochete geneticamente modificati. Questi batteri portano il gene di resistenza alla gentamicina.
Aggiungere una sospensione di batteriofagi alla coltura batterica.
I batteriofagi trasportano DNA plasmidico che codifica per un gene di resistenza alla kanamicina.
Incubare la miscela.
Il batteriofago si attacca alla superficie batterica e inietta il DNA nella cellula.
Il plasmide si replica in modo indipendente e viene trasmesso quando i batteri si dividono.
Mescolare la coltura incubata con un mezzo di agarosio fuso integrato con antibiotici gentamicina e kanamicina.
Versare la miscela in una piastra. Lasciarla solidificare e quindi incubare.
Sotto selezione con doppio antibiotico, solo le cellule che portano entrambi i marcatori di resistenza crescono e formano colonie, mentre le cellule rimanenti muoiono.
Scegliere una colonia e inoculare in un mezzo contenente entrambi gli antibiotici.
Incubare per favorire la crescita dei batteri con il plasmide transdotto per ulteriori analisi a valle.
Decantare il soprannatante e risospendere il pellet in 14,5 millilitri di BSK fresco. Aggiungere meno di o uguale a 500 microlitri di campione di fago precipitato con PEG
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