Recupero del virus Zika da RNA trascritto in vitro
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:36 min. • August 31st, 2026
Iniziare con provette contenenti una sospensione di cellule Vero.
Aggiungere acqua al campione di controllo e introdurre un RNA trascritto in vitro (IVT) nel campione sperimentale.
L'RNA rappresenta il genoma completo del virus Zika.
Trasferire ogni campione nei cuvetto per elettroporazione.
Applicare l'elettroporazione.
Un breve impulso elettrico altera la membrana della cellula ospite e crea pori transitori, consentendo all'RNA di entrare nelle cellule.
Aggiungere un mezzo per supportare il recupero cellulare.
Trasferire le cellule nei flaconi contenenti un mezzo di coltura.
Incubare per permettere all'RNA virale di indurre la sintesi proteica e la replicazione del genoma, portando all'assemblaggio di nuovi virioni.
Le virioni vengono rilasciate e si diffondono alle cellule vicine.
L'aumento del carico virale intracellulare provoca infine la morte della cellula ospite.
Monitorare le colture al microscopio.
Un aumento della morte cellulare nel campione sperimentale rispetto al controllo conferma il recupero di virus infettivo dall'RNA trascritto in vitro (IVT).
Uno o due giorni prima dell'elettroporazione, preparare un fiasco T182 di cellule Vero per ogni costrutto da recuperare.
Includere un f
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