JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:36 min. • August 31st, 2026
Iniziare con una sospensione contenente precipitati di intasomi del virus della foamy prototipo o PFV, integrasi monomerici, oligomeri di DNA e aggregati proteici.
Gli intasomi del PFV sono tetrameri di integrasi virali complessati con oligomeri sintetici che mimano il DNA genomico virale.
Aggiungere una soluzione salina alla sospensione e incubare sul ghiaccio. Il sale riduce l'interazione elettrostatica tra gli intasomi, consentendo ai precipitati di solubilizzarsi.
Pipettare delicatamente a intervalli regolari per favorire la solubilizzazione dell'intasoma.
Centrifugare per formare il pellet del precipitato residuo e raccogliere il sopranatante contenente gli intasomi solubili.
Prendere una colonna di cromatografia a esclusione dimensionale preriscaldata, riempita con perline di agarosio reticolato, e caricare il sopranatante sulla colonna.
A causa delle loro grandi dimensioni, gli aggregati proteici e gli intasomi bypassano i pori delle perle e vengono eluiti precocemente.
Gli integrasi monomerici più piccoli e gli oligomeri entrano nei pori delle perle e vengono eluiti in un secondo momento.
Raccogliere le frazioni eluite precocemente contenenti intasomi per ulteriori analisi a valle.
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