JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:52 min. • August 31st, 2026
Si inizia con una coltura di cellule di cancro al fegato umano trasfettate con RNA del virus dell'epatite E (HEV) per produrre particelle virali.
Alcuni HEV acquisiscono una membrana endosomiale di origine ospite ed escono dalla cellula, mentre altri rimangono all'interno della cellula come HEV non rivestiti.
Per raccogliere gli HEV extracellulari, raccogliere e filtrare il surnatante di coltura per rimuovere i detriti cellulari.
Conservare a una temperatura ultra-bassa per preservare l'infettività.
Per raccogliere gli HEV intracellulari, lavare le cellule con un buffer.
Aggiungere tripsina-EDTA per staccare le cellule, quindi aggiungere un mezzo per arrestare l'attività enzimatica.
Trasferire la sospensione in un tubo e centrifugare.
Scartare il soprannatante contenente la tripsina residua. Ri-sospendere il pellet e trasferirlo in una provetta.
Congelare le cellule in azoto liquido e scongelarle sul ghiaccio.
Ripetere i cicli di congelamento-scongelamento per lisare le cellule, rilasciando i virus.
Centrifugare, raccogliere il soprannatante contenente i virus e conservare a una temperatura ultra-bassa.
A giorno sei, filtrare il sopranatante attraverso una membrana da 0,45 micrometri per rimu
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