Riprogrammazione di cellule ematiche umane in cellule staminali pluripotenti indotte mediante virus Sendai

Prelevare una coltura di cellule mononucleate del sangue periferico umano (PBMCs).

Aggiungere il virus Sendai che codifica i fattori di trascrizione per la riprogrammazione. Coprire e sigillare la piastra.

Centrifugare per favorire il contatto virus-cellula e incubare.

Dopo la fusione del virus, l'RNA virale esprime fattori di trascrizione che attivano i geni di pluripotenza cellulare e reprimono i geni specifici della linea per avviare il riprogrammazione.

Nel frattempo, un sottoinsieme di PBMC trasdotti si trasforma in cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) ed esprime proteine di adesione.

Trasferirli in una pozzetta rivestita con matrice e centrifugare le cellule. Sostituire il soprannatante con un mezzo di crescita.

Dopo l'incubazione, le iPSC aderiscono alla matrice, mentre i PBMC transdotti non aderenti rimangono in sospensione.

Trasferire la sospensione in un pozzetto rivestito e centrifugare. Aggiungere il mezzo al pozzetto originale e incubare entrambi.

I PBMC transdotti rimanenti iniziano il riprogrammamento, si trasformano in iPSC e aderiscono. Questo passaggio massimizza il trattenimento delle cellule riprogrammate.

Sostituire il mezzo ogni giorno per sostenere la crescit