JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:48 min. • August 31st, 2026
Prelevare una coltura cellulare di mammifero in fase stazionaria con replicazione del DNA minima e raccogliere il mezzo condizionato.
Aggiungere il virus dell'herpes simplex (HSV) e incubare con agitazione occasionale per favorire l'attacco virale. Lavare per rimuovere il virus non legato e ripristinare il mezzo condizionato.
Dopo l'incubazione, il virus si fonde con la membrana dell'ospite, rilasciando il nucleocapside nel citoplasma.
Il dsDNA virale entra nel nucleo, si circolarizza ed esprime le proteine virali necessarie per la replicazione del DNA virale.
Le proteine virali e quelle dell'ospite svolgono il DNA virale e sintetizzano un primer di RNA. Successivamente, il complesso della DNA polimerasi virale si lega ed estende il primer per la sintesi del DNA.
Man mano che la replicazione procede, aggiungere un analogo dei nucleosidi al terreno di coltura. Questo entra nelle cellule e viene convertito in forma tri-fosfata.
Poiché la replicazione del DNA dell'ospite è minima, l'analoghi viene incorporato in modo preferenziale nel DNA virale in replicazione, etichettando così i genomi virali.
I genomi virali marcati sono pronti per l'analisi proteomica a valle delle proteine associate.
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