JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 5:13 min. • August 31st, 2026
Prendere i nuclei cellulari contenenti genomi virali, etichettati con nucleotidi modificati con alchino.
Sospendere i nuclei in una miscela di azide biotinilata e ioni rameici, quindi incubare.
L'ione rameico favorisce il legame covalente tra il gruppo azide e il gruppo alchino.
Centrifugare e scartare il soprannatante.
Risospendere nel buffer, trasferire e centrifugare per ottenere il pellet.
Congelare rapidamente, quindi scongelare il pellet per facilitare la lisi.
Risospendere e sottoporre a sonica per lisare i nuclei.
Centrifugare e raccogliere il surnatante contenente i complessi proteina-DNA virale.
Filtrare il soprannatante per rimuovere i contaminanti.
Diluire il filtrato.
Aggiungere le perle magnetiche rivestite di streptavidina e incubare per favorire il legame con i complessi proteina-DNA biotinilati.
Applicare un campo magnetico per raccogliere le perle e lavare per rimuovere i contaminanti.
Ripetere il lavaggio.
Aggiungere un buffer di eluizione e riscaldare per separare e denaturare le proteine.
Separare le perle magnetiche e raccogliere l'eluito.
Congelare rapidamente le proteine isolate. Conservare a temperature ultra-basse per ulteriori analisi.
Dopo aver completamente rimosso il
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