Isolamento di Virus Endogeni da Drosophila Selvatiche Mediante Linee Cellulari Permissive Ingegnerizzate

Iniziare con un tubo contenente adulti anestetizzati della stessa specie e sesso di Drosophila.

Aggiungere un buffer e omogeneizzare per liberare le popolazioni virali endogene e i batteri.

Centrifugare l'omogenato, quindi far passare il soprannatante attraverso una membrana mediante centrifugazione per rimuovere batteri e detriti.

Trasferire il filtrato in una piastra a pozzetti contenente colture cellulari di Drosophila ingegnerizzate, permissive ai virus a RNA, e incubare.

I virusi entrano nella cellula ospite mediante endocitosi mediata da recettore.

Una volta all'interno, il genoma virale si replica, producendo RNA a doppio filamento (dsRNA) intermediari.

Le cellule ospiti esprimono una proteina soppressore che si lega al dsRNA, impedendone la degradazione da parte della Dicer, l'enzima di difesa dell'ospite.

Questo permette la sintesi dell'RNA virale e la produzione di proteine virali, favorendo la replicazione e l'amplificazione virale.

Carichi virali elevati compromettono la crescita delle cellule ospiti e producono effetti citopatici.

Centrifugare brevemente la piastra.

Raccogliere il surnatante contenente le popolazioni virali e conservarlo a bassa temperatura per analisi successiv