Purificazione di vettori adenovirali contenenti genoma basata su cloruro di cesio

Iniziare con cellule di mammifero infettate da un adenovirus.

Eseguire cicli ripetuti di congelamento-scongelamento per lisare le cellule e rilasciare i virioni.

Centrifugare il lisato per formare un pellet dei detriti. Raccogliere il soprannatante contenente le particelle virali.

Deporre il surnatante virale su un gradiente a gradini di cloruro di cesio per la separazione in base alla densità.

Ultracentrifugare per consentire alle particelle virali di migrare in base alle loro densità di galleggiamento.

I virioni integri che contengono il genoma adenovirale completo sono più densi a causa del DNA impacchettato e si depositano in una banda più bassa, mentre le capside vuote e i detriti più leggeri rimangono negli strati superiori.

Rimuovere gli strati superiori. Raccogliere la banda inferiore di virioni contenenti il genoma.

Risospendere i virioni in cloruro di cesio a densità uniforme e sottoporli nuovamente a ultracentrifugazione per affinare la separazione e concentrare le particelle complete.

Scartare gli strati superiori e recuperare la banda inferiore.

Dializzare il campione per rimuovere il cloruro di cesio.

I vettori adenovirali ad alta purezza, contenenti il genoma, sono ora pronti