JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:08 min • August 31st, 2026
Iniziare con un topo anestetizzato posizionato in posizione supina, con la cute toracica rasata.
Disinfettare la pelle rasata.
Utilizzare l'imaging ecografico per visualizzare il cuore e identificare la parete esterna del ventricolo sinistro.
Prendere una microssiringa contenente un virus ricombinante che codifica per un gene test sospettato di influenzare la funzione cardiaca.
Sotto guida ecografica, inserire l'ago nella parete ventricolare.
Iniettare il virus nello strato muscolare della parete.
Eseguire una seconda e una terza iniezione, mirando a siti ventricolari diversi per ottenere un'espressione genica più ampia.
Estrarre l'ago e permettere al topo di riprendersi.
Il virus si lega ai recettori sulle cellule muscolari ventricolari, iniziando l'endocitosi mediata da recettore e il trasporto del genoma virale verso il nucleo.
L'espressione del genoma virale porta alla sintesi della proteina codificata.
Il modello murino è ora pronto per valutare gli effetti dell'espressione genica indotta dal virus sulla funzione cardiaca.
Per iniziare, sterilizzare la regione toracica inferiore sinistra del topo anestetizzato con alternanza di tre passaggi circolari di una soluzione a base di iodio o clorhexidina in alcol. Sotto guida ecografica, inserire l'ago della siringa contenente il virus nel torace dell'animale.
Avvicinare la punta dell'ago alla parete libera anteriore del ventricolo sinistro ed iniettare lentamente da 10 a 15 microlitri del virus. Verificare l'avvenuta iniezione mediante immagini ecografiche, osservando un aumento della luminosità in prossimità della punta dell'ago. Ritirare l'ago dal cuore ed inserirlo in altre regioni del ventricolo sinistro per una seconda e una terza iniezione della stessa quantità di virus.