JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:08 min. • August 31st, 2026
Iniziare con un sistema di bioreattore contenente un impalcatura di fegato di ratto descelularizzato ripopolato con cellule epatiche umane.
Il scaffold viene mantenuto in un sistema a flusso che circola il mezzo per fornire nutrienti.
Caricare una siringa con un tampone contenente un vettore virale ricombinante adeno-associato.
Il vettore trasporta un DNA auto-complementare con una cassetta di transgene che codifica per un reporter fluorescente e un RNA di silenziamento genico.
Fermare il flusso del mezzo e scollegare il tubo di ingresso.
Iniettare il vettore attraverso il principale vaso sanguigno che fornisce lo scaffold.
Incubare per consentire l'interazione tra vettore e cellule.
Il vettore entra nelle cellule epatiche mediante endocitosi mediata da recettore.
Una volta all'interno, il vettore fuoriesce dall'endosoma e rilascia il suo DNA auto-complementare nel nucleo.
Il DNA autocomplementare consente un'espressione diretta del transgene, producendo una proteina fluorescente e un RNA di silenziamento genico.
Riprendere gradualmente il flusso del mezzo per ripristinare la circolazione attraverso lo scaffold.
Il modello di fegato transdotto è ora adatto per analisi successive.
Ora si proced
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