Crescita virale in cellule epiteliali nasali umane coltivate all'interfaccia aria-liquido

Iniziare con cellule epiteliali nasali umane ricoperte di muco, coltivate su un inserto transwell in una piastra multipozzetta.

Il lato basale della coltura è a contatto con il mezzo, mentre la superficie apicale è esposta all'aria, simulando l'interfaccia aria-liquido della cavità nasale.

Lavare la coltura con tampone per rimuovere lo strato di muco.

Aggiungere il coronavirus, sospeso in mezzo privo di siero, alla coltura.

Incubare la piastra con movimenti oscillatori occasionali per garantire l'adsorbimento virale.

Rimuovere l'inoculo virale e lavare con tampone per eliminare i virus non legati.

Rimuovere l'inserto e rifornire la pozzetta con mezzo fresco.

Incubare la piastra per consentire l'infezione virale.

Il coronavirus si lega al recettore sulla superficie cellulare, entra per endocitosi e rilascia il suo genoma nel citoplasma.

Il genoma virale si replica e produce proteine, che si assemblano in nuovi virus.

I nuovi virus vengono rilasciati in maniera apicale, si diffondono infettando cellule vicine e amplificano la crescita virale.

Coltivare e differenziare le colture nasali all'interfaccia aria-liquido, o colture ALI, in inserti transwell dotati di una camera basale e una apicale. E